17.06.2016
STED-CW-FLIM
Доступен новый режим работы микроскопа со сверх-разрешением: STED-CW-FLIM. Стимулированная эмиссия, используемая в методе STED для получения сверх-разрешения процесс не одномоментный, а занимающий некоторое время. Существует метод, Fluorescence Lifetime IMaging (FLIM), позволяющий получить информацию о времени детекции каждого фотона от препарата. Любой флуорохром кроме обычных характеристик (спектр возбуждения, спектр испускания, квантовый выход, коэффициент поглащения) имеет ещё одну важную характеристику - время жизни возбуждённого состояния. Использование истощающего лазера уменьшает время жизни облучаемого флуорохрома, но в обычном случае, в STED микроскопии собирается весь свет и с небольшим временем жизни - свет от всего возбуждённого пятна, и с большим временем жизни - свет от пятна, на который не попадает истощающий свет. В случае использования STED-CW-FLIM можно учитывать только фотоны пришедшие через сравнительно большой промежуток времени - 0,2 - 4 нс, таким образом собирается только информация из самого центра пятна и значительно повышается разрешение.
Конфокальное изображение
Изображение по методике STED-CW
Изображение со временем жизни от 0.2 до 4 нс.
