Bruker ImagePrep

Изображение с сайта www.bruker.com

      Bruker ImagePrep позволяет получать воспроизводимое нанесение матрицы на гистологические препараты для визуализации методом МАЛДИ, позволяя полностью автоматизировать этот этап процесса пробоподготовки.

Средний размер формируемых капель составляет ~20 мкм
Общий размер пятна < 50 мкм.
Подробнее на сайте компании производителя http://www.bdal.com/ru/products/maldi/imageprep/overview.html

      Прибор использует пьезокристалл для создания аэрозоля и камеру для препарата, с контроллируемыми условиями, для равномерного нанесения матрицы на препараты в ходе подготовки к тканевой матрично-активированной лазерной десорбционно/ионизационной молекулярной визуализации, (молекулярная гистология,MALDI imaging).

     Все классические гистологические исследования, в сущности, сводятся к выявлению анизотропности в распределении биомаркеров, например классическая окраска гематоксилин-эозином, позволяющая выявить анизотропию по сродству к компонентам окраски. Этот класс методов не позволяет выявлять отдельные известные белки. Современные иммуногистохимические и иммунофлуоресцентные методы позволяют выявить одновременное распределение нескольких заранее известных биомаркеров. Однако при этом исследуемые белки должны быть известны априори и для них должны быть выработаны соответствующие антитела.

      С другой стороны, современные методы молекулярной биологии и биохимии позволяют выделять из пробы все биомаркеры, фракционировать их, изучать пост-транскрипционные изменения, например, фосфорилирование определённых белков. В последние десятилетия активно используются методы МАЛДИ-массспектрометрии. Этот метод при использовании тандемных масс-спектрометров позволяет проводить «белковый сиквенс» то есть устанавливать последовательность аминокислотных остатков, входящих в состав белка. В отличие от классических биохимических методов, таких как Эдмановская деградация, МАЛДИ позволяет вести восстановление последовательности пептида с обеих сторон, что даёт возможность оценивать изменения и с -NH2 и с -COOH сторон биомаркера. Этот метод позволяет выделить все пептиды и короткие белки в исследуемой пробе, при этом отсутствует необходимость в использовании какой-либо дополнительной метки или априорном знании о составе белка. Однако эти методы до недавнего времени не позволяли получать информацию о анизотропности в распределении биомаркеров на исследуемом препарате с достаточным разрешением.

      В прошлом десятилетии появился метод MALDI молекулярной визуализации, который сразу был окрещён методом «молекулярной гистологии». Суть метода заключается в специальной подготовке среза изготовленного на криостатирующем микротоме для последующего его использования в МАЛДИ-массспектрометрии. Масс-спектрометр последовательно получает спектрограмму для каждой точки препарата (до 50 мкм). Спектрограмма отражает весь набор присутствующих в данной точке биомаркеров, что позволяет, например, количественно оценить наличие всех белков в этой точке препарата. После исследования препарат может быть окрашен классическими гистологическими или иммуногистохимическими методами. При микроскопировании и оцифровке препарата данные полученные с масс-спектрометрии могут быть однозначно соотнесены с полученной гистологической картиной.

При помощи MALDI молекулярной визуализации могут решаться следующие актуальные задачи:

1. Оценка распределения введённого лекарства в тканях модельного животного.

2. Оценка фосфолипидного состава мембран клеток в ходе экспериментального воздействия, например, гипоксии или оксидационного стресса.

3. Двух- и трёх- мерная реконструкция распределения белка известной молекулярной массы в тканях модельного животного в норме и при экспериментальном воздействии.

4. Молекулярная классификация тканей, статистическое выявление отличий белкового или липидного состава нормальной и опухолевой тканей.

5. Комплексная оценка изменения протеома (всей совокупности синтезируемых клеткой белков) в развитии организма, процессах перерождения, регенерации и старения.

6. Оценка накопления и распределения известных метаболитов или поиск новых метаболитов в исследуемой ткани.

7. Сравнение протеомов биопсий и архивных гистологических препаратов при идеопатических изменениях с целью их классификации и поиска причины возникновения.

Подробнее - http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2007/072905/full/nmeth1039.html

     Гистологические препараты, подготовленные криотомированием или вибротомированием, смонтированные на специальные предметные стёкла с электро-проводящим  покрытием.

---

Смотрите также:

• Криостатирующий микротом Leica CM-3050S
• Вибратом Leica VT1200S,
• МАЛДИ масс-спектрометр Bruker Ultraflextreme